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PCR(polymerase chain reaction) :聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),又稱體外DNA擴(kuò)增技術(shù)。在模板DNA,4種游離脫氧核糖核苷酸存在情況下利用DNA聚合酶的功能,將待擴(kuò)增DNA片段與其兩側(cè)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈引物進(jìn)行“變性——退火——延伸” 多次循環(huán),從而在短時(shí)間內(nèi)獲得大量所需目的基因片段。
師妹:DNA擴(kuò)增條帶跑不出,很多非特異性條帶真的辣眼睛,片狀拖帶二度崩潰......
師兄:影響PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果的原因有很多,下面這些需要注意:
1. 模板DNA降解,濃度過低了?
2. 引物設(shè)計(jì)不當(dāng)降解了?特異性差?
3. 酶的質(zhì)量有問題,加酶量過多?
4. PCR循環(huán)次數(shù)過多?
5. PCR儀循環(huán)次數(shù)過多?溫度不當(dāng)?
6. Mg2+濃度過高或過低?
7. dNTP濃度過高或過低?
小為:工欲善其事,必先利其器,別看分子實(shí)驗(yàn)操作相對(duì)簡單,影響因素卻很多,PCR耗材是一個(gè)非常重要,也極易被忽視的因素之一。
GENEVER
治愈你的PCR耗材選擇困難癥
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材質(zhì)
PCR耗材通常由聚丙烯(Polypropylene,PP)制成,聚丙烯具有化學(xué)惰性,可最大限度的降低反應(yīng)物質(zhì)的吸收確保實(shí)驗(yàn)得到最佳的PCR結(jié)果,且聚丙烯制成的耗材能夠承受PCR反應(yīng)熱循環(huán)過程中的溫度不斷快速變化。另外自動(dòng)化實(shí)驗(yàn)室還需要用到雙材質(zhì)(PP+PC)PCR耗材,某些qPCR板還會(huì)使用更強(qiáng)的聚碳酸酯制做邊框,從而提高PCR板邊框的機(jī)械穩(wěn)定性。
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不同顏色的PCR板我應(yīng)該怎么選呢?
PCR板通常可以提供多種顏色,一方面提供更好的辨識(shí)度,以便于對(duì)于樣品的視覺區(qū)分、頁面觀察等,特使是在高通量實(shí)驗(yàn)中。另一方面提供更準(zhǔn)確的檢測結(jié)果,通常以透明和白色為主,對(duì)于DNA擴(kuò)增,塑料顏色對(duì)DNA擴(kuò)增沒有影響,我們可推薦的產(chǎn)品種類較多,但在qPCR反應(yīng)中,與透明耗材相比,我們更推薦使用白色或磨砂透明的耗材,以實(shí)現(xiàn)靈敏和準(zhǔn)確的熒光檢測。
白色耗材可通過阻止熒光折射出反應(yīng)管來提高qPCR數(shù)據(jù)的靈敏度和一致性,折射被最小化時(shí),更多的信號(hào)被反射回檢測器,從而增加信噪比。此外,白色或磨砂管壁可阻止熒光信號(hào)傳遞至PCR儀加熱模塊,避免被吸收或不一致的反射熒光信號(hào)。
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不同體積的PCR管/板,我該怎么選呢?平蓋 or凸蓋?
常見反應(yīng)管規(guī)格及體積:
單管:0.2mL,0.1mL,0.5mL,靈活選擇樣品數(shù)
八聯(lián)排管:0.2mL,0.1mL
96孔板:0.2mL,0.1mL(高通量)
對(duì)于八聯(lián)排管或者96孔板,一般會(huì)區(qū)分高容量和低容量,即0.2mL和0.1mL,0.1mL也叫快速反應(yīng)管或板。不同廠家有不用的叫法,以Bio-Rad為例,他們習(xí)慣性將0.1mL叫做Low-profile,0.2mL叫做High-profile,而國內(nèi)則一般就叫0.1mL、0.2mL板或者管。
選擇平蓋還是凸蓋?
平蓋:qPCR的不二之選,為qPCR提供精確熒光傳遞,書寫標(biāo)記。
凸蓋:更適合常規(guī)PCR,可與熱蓋接觸,減少變形,但是影響熒光傳遞,不適合qPCR使用。
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如何選擇裙邊?
PCR“裙邊”是為96孔板,384孔板設(shè)計(jì)的,可為反應(yīng)體系構(gòu)建時(shí)的移液過程提供較好穩(wěn)定性,以及在自動(dòng)化機(jī)械處理時(shí)提供更好的機(jī)械強(qiáng)度。包括無裙邊,半裙邊,全裙邊。
無裙邊板:周圍缺少面板,可適用于大多數(shù)的PCR儀或qPCR儀,不適用于自動(dòng)化應(yīng)用。移液過程中穩(wěn)定性不高,需要配合板托使用。
半裙邊板:板周圍具有短的邊緣,可提供足夠支撐,且適配標(biāo)簽或應(yīng)用條碼,可用于自動(dòng)化應(yīng)用,較全裙板裝液量大。
全裙邊板:具有覆蓋板高度的邊緣面板,非常適用于自動(dòng)化實(shí)驗(yàn)應(yīng)用,也可適配標(biāo)簽及應(yīng)用條碼。機(jī)械強(qiáng)度較好,可適用于凸出模塊的PCR儀,且移液過程中穩(wěn)定性高。
Tab.不同類型裙邊性能對(duì)比
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切角
切角是PCR板的一個(gè)角缺失者兩個(gè)角缺失,取決于所需適配的機(jī)器。切角位置可位于,切角可能位于96孔板的A1、A12、H1或H12位置,或384孔板的A24或P24位置,一般的普通PCR儀對(duì)于切角沒有要求。
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PCR封板膜有很多類型,怎么選擇呢?
PCR實(shí)驗(yàn)要求選用適配的高質(zhì)量封板膜,不僅能有效地保護(hù)樣品,防止污染,還可以提供可信賴的實(shí)驗(yàn)檢測數(shù)據(jù)。
qPCR高透膜:由高透光的塑料薄膜制成,一般有粘性膜和壓感膜兩種,每一種均可提供優(yōu)良的透光率,確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。
PCR膜:條膜密封8聯(lián)管,減少管蓋密封變形造成的漏液風(fēng)險(xiǎn),經(jīng)濟(jì)方便;板膜適合PCR,以及ELISA,ELA等顯色分析實(shí)驗(yàn),透光,適合光學(xué)和肉眼觀察。
PCR儲(chǔ)存膜:適合PCR,ELISA或者樣品儲(chǔ)存,可重復(fù)使用。也可-80度樣品保藏透明,可用于顯色分析或肉眼觀察。
GENEVER
Genever PCR Tubes&Plates高品質(zhì)PCR耗材系列
PCR耗材
透明高分子聚丙烯制成,孔壁薄,厚度均勻,具有極好的熱傳導(dǎo)效應(yīng),結(jié)果可靠,重復(fù)性強(qiáng)。
密封性好,可有效減少樣品蒸發(fā)。
尺寸符合ANSI SBS標(biāo)準(zhǔn),可用于自動(dòng)化應(yīng)用。
黑色字母標(biāo)識(shí),手動(dòng)加樣時(shí)可快速識(shí)別樣本并溯源。
十萬級(jí)潔凈環(huán)境生產(chǎn),專屬質(zhì)量實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證測試,確保產(chǎn)品潔凈度。
每個(gè)孔都進(jìn)行100%密封性能測試,確保樣本處理安全性。
無熱原,無內(nèi)毒素,無DNA/RNA酶。
目前產(chǎn)品有單管(平蓋),八聯(lián)管(A款&B款),八聯(lián)排管,96孔板,384孔板5種規(guī)格,其中96孔板提供無裙邊、半裙邊,全裙邊,容量有0.1ml和0.2ml,顏色分為透明和白色兩種。
訂購信息
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建諾為 PCR單管(平蓋)
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建諾為 PCR八聯(lián)管
3
建諾為 PCR連蓋八聯(lián)排管
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建諾為 PCR 96孔 PCR板
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建諾為 384孔板
6
建諾為 PCR管架96孔
7
建諾為 PCR封板膜
建諾為生物技術(shù)(江蘇)有限公司
電話:4009968872
網(wǎng)址:www.stock21.cn
地址:泰州市醫(yī)藥高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)開發(fā)區(qū)綜合保稅區(qū)三期三號(hào)標(biāo)準(zhǔn)廠房A棟